隨著激光技術、光譜技術、顯微技術以及光纖技術的飛速發展,它們(men) 在生物科學的研究與(yu) 醫學診斷中的應用與(yu) 醫學診斷中的應用越來越深入和廣泛,已成為(wei) 現代生命科學中的重要工具,並為(wei) 之帶來革命性變化。
熒光探劑與(yu) 激光掃描共焦顯微術
激光掃描共焦顯微術的基本原理是,在細胞內(nei) 一個(ge) 任意選定的深度上將激光束聚焦成線度接近單個(ge) 分子的極小的斑點,並在細胞內(nei) 一定深度的層麵上進行掃描,通過光學係統,即可得到細胞一個(ge) 層麵的清晰圖象。連續改變激光的聚焦深度,在一係列的層麵上進行掃描,最後獲得整個(ge) 細胞的三維圖象。利用目前已達上千種與(yu) 細胞內(nei) 不同分子(或離子)特異性結合的熒光探針,人們(men) 就可以直接觀測活細胞中各種重要生物分子的位置、運動以及與(yu) 其它分子的相互作用等。例如觀測細胞骨架上的微管、微絲(si) 與(yu) 中間纖維,觀察信號轉導通路上的各種重要的酶與(yu) 信使分子,還可利用基因重組技術將自身已有的熒光蛋白引入細胞,用激光掃描共焦顯微鏡研究基因的表達、細胞內(nei) 蛋白質的相互作用與(yu) 細胞內(nei) 的“交通”等。熒光探針和熒光蛋白與(yu) 激光共焦顯微術的結合,使人們(men) 能夠看到細胞內(nei) 一個(ge) 既複雜又異彩紛呈的世界。
多光子熒光成像技術
目前,共焦顯微成像術使用的是可見光波段的氬離子激光器,因此可能引起活細胞的損傷(shang) 。利用多光子,如多光子激發,至少有以下三個(ge) 優(you) 點:一是由於(yu) 近紅外光激發,故對活細胞的損傷(shang) 大大減小;二是在組織中由於(yu) 近紅外光比可見光的透光率高,因此可觀測樣品中更深層的熒光成像;三是許多用在可見區甚至紫區的熒光探劑照樣可以使用。這種技術主要是使用高強度紅外激光,使雙光子的激發效率與(yu) 短波長的單光子相當。現在已有一些激光器滿足這一要求。
光鉗和單分子操作
光鉗(Optical tweezer)技術誕生於(yu) 20世紀80年代,發展於(yu) 90年代。其基本原理是:當一個(ge) 微粒(如一個(ge) 與(yu) 生物大分子結合的矽珠)處於(yu) 一個(ge) 強度按高斯分布的激光光束中時,由於(yu) 光場強度的空間變化,光束將對微粒產(chan) 生一種梯度壓力,驅使其移向光束中心,並使其穩定在那裏。這樣,激光束就似“鉗子”將粒子牢牢地鉗住,並令其隨光束人為(wei) 地移動。光鉗施加在微粒上的壓力取決(jue) 於(yu) 光的波長、光束的寬度及功率等。當激光器的功率為(wei) 幾毫瓦到幾瓦時,施加於(yu) 尺寸為(wei) 微米大小的微粒上的力大約為(wei) 幾個(ge) 到幾百皮(10-10)牛頓。為(wei) 了不使激光被生物組織強烈吸收,為(wei) 了不使激光被生物組織強烈吸收,光鉗一般使用近紅外激光器光源。光鉗技術的重要應用是,用以研究和觀測與(yu) 肌肉收縮、細胞分裂、蛋白質合成等密切相關(guan) 的一類蛋白質——分子馬達。研究時,將一個(ge) 微米大小的矽珠或聚苯乙烯珠與(yu) 這些分子馬達接在一起,在顯微鏡下用光鉗鉗住小珠,啟動分子馬達,就可以測量出分子馬達運動時產(chan) 生的力。德國學者已經用激光在卵細胞膜上打孔,用光鉗將精子抓住並送入卵細胞,大大提高了體(ti) 外受精的成功率。今後,新一代的光鉗將具備施力的反饋機製,使光鉗加在捕捉的離子上的力能改變其大小,從(cong) 而研究影響分子馬達的各種因素。光鉗還可以用來對細胞進行各種加工等。因此,光鉗將在細胞工程技術方麵發揮重要的作用。
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